O presente trabalho atendeu às normas para a realização de pesquisa em animais e os procedimentos foram de acordo com os princípios éticos da experimentação animal, preconizados pelo Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal (CONCEA) com base na Diretriz Brasileira para o cuidado e utilização de animais para fins científicos e didáticos – DBCA (2013), sendo aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal da UFS (CEPA/UFS) protocolo 10/2014. Ratos Wistar de ambos os sexos foram mantidos em gaiolas de polipropileno com água e ração ad libitium e a temperatura foi de 22 ± 1°C. Foram utilizadas 15 ratas Wistar virgens, entre 90 e 120 dias de vida, pesando entre 250‐300g, acasaladas com ratos férteis na proporção de quatro fêmeas para um macho. A técnica de esfregaço vaginal foi realizada diariamente para a verificação da prenhez pela presença de espermatozoides. Posteriormente, as ratas foram divididas em dois grupos conforme a dieta recebida, Controle (n = 5) e Ocidental (n = 5), mantidas até o desmame. Após 24 horas do nascimento das ninhadas, realizou‐se o ajuste para oito neonatos, sendo respeitada, quando possível, a mesma proporção de machos e fêmeas. Nos protocolos experimentais, foram utilizados somente machos para evitar a influência de flutuações hormonais do ciclo estral nos resultados.

Após o desmame, os filhotes foram divididos em três grupos: i) Controle (C, n = 7), filhotes de mães alimentadas com a dieta controle e que não realizaram o TR; ii) Dieta Ocidental Sedentário (OCS, n = 7), filhotes de mães alimentadas com a dieta ocidental e que não realizaram TR; e iii) Dieta Ocidental Treinado (OCTR, n = 7), filhotes de mães alimentadas com a dieta ocidental e que realizaram TR.

Após o desmame, o alimento ofertado aos animais foi ração comercial Labina® para roedores. Segundo o fabricante (Purina do Brasil Ltda), a dieta contém o mínimo de 23% de proteína bruta, extrato etéreo mínimo de 4%, o máximo de 10% de mineral, 5% de matéria fibrosa e possui 3,6Kcal/g.

A dieta utilizada como controle durante o período de gestação e lactação foi a AIN‐93G, à base de caseína, específica para roedores em fase de crescimento12. A formulação da dieta experimental ocidental teve como base a Pesquisa de Orçamento Familiar (POF), sendo realizados alguns ajustes na sua composição centesimal. Dentre estes ajustes, encontra‐se o aumento do teor de lipídeos e carboidratos simples, de forma a incrementar fatores organolépticos, culminando com odor e textura agradável, assemelhando‐a à dieta ocidental, e a adequação do teor proteico, visto que os percentuais de proteína da dieta POF são inadequados para a fase de reprodução e crescimento em ratos e, finalmente, um ajuste para a fase de manutenção dos ratos (15,5% de proteína).

A dieta ocidental continha 31% de lipídios, sendo a principal fonte as gorduras de origem saturada (67,59%) e 51,7% de carboidratos, sendo apresentado principalmente na forma de açúcares simples, o que mimetiza o consumo alimentar da população ocidental e a dieta controle 25,99% lipídios saturados e 55% de carboidratos em cada 100g.

As dietas Controle (AIN‐93G) e Ocidental foram produzidas pelo Laboratório de Nutrição Experimental e Dietética (LNED) do Departamento de Nutrição da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) e foram armazenadas a 4°C até o momento de utilização.

O TR foi executado utilizando o aparelho de agachamento.13 Os animais foram adaptados por cinco dias anteriores ao treinamento, sendo manipulados e colocados no aparelho na posição inicial do exercício, sem adição de carga.

Após a adaptação, todos os animais foram submetidos ao teste de repetição máxima (1RM) para a determinação das cargas de trabalho. O teste de 1RM consiste na execução do movimento com o máximo de carga que o animal conseguir realizar o movimento de extensão total das patas traseiras. Assim, é possível calcular a intensidade desejada através da carga levantada no teste. Após 48 horas, iniciou‐se o protocolo de TR que consistiu em três séries de dez repetições com intensidade de 40% de 1RM (considerada baixa intensidade)14, com intervalo de um minuto entre as séries para recuperação. Cada sessão de TR durou aproximadamente cinco minutos. O TR foi realizado cinco vezes por semana, durante um período de quatro semanas, totalizando vinte sessões de TR. A cada 15 dias, foi feito novo teste de 1RM para reajuste das cargas.

Os animais foram estimulados através de eletrodos colocados na cauda (Bioset, Physiotonus four, Modelo 3050, Rio Claro, São Paulo) para a realização do exercício. Os parâmetros utilizados foram: frequência de 1Hz, largura de pulso de 1ms, tempo on de 1 a 3 segundos, tempo off de 2 segundos e intensidade suficiente para que os animais executassem o exercício, variando de 4 a 15mA. Os animais dos grupos C e OCS foram inseridos no aparelho de agachamento e eletroestimulados com parâmetros iguais ao grupo OCTR, porém o equipamento esteve mantido na posição de repouso e sem adição de carga.

Os animais foram anestesiados com tiopental sódico (i.p) (50mg/kg) e foi realizada cirurgia para implante de cateter de polietileno (PE‐10/PE‐50, Intramedic, Becton Dickinson and Company, Sparks, MD, EUA) na artéria femoral esquerda. O cateter foi exteriorizado por via subcutânea na região cervical posterior. Após a cirurgia, os animais receberam uma dose (1,1mg/kg, i.p) de flunixina‐meglumina (Banamine®, Schering Plough, Kenilworth, NJ, EUA) para redução da hiperalgesia e do processo inflamatório pós‐cirúrgico, garantindo assim o bem‐estar dos animais.

Vinte e quatro horas após o procedimento e livre dos efeitos da anestesia, o cateter foi conectado ao transdutor de pressão e acoplado a um pré‐amplificador (FE221, Bridge Amp, ADInstruments, Bella Vista, NSW, Austrália) utilizando o sistema de registro (Powerlab, ADInstruments, Bella Vista, NSW, Austrália). A PA pulsátil foi registrada por 30 minutos e processada em software computacional (LabChart 7, ADInstruments, Bella Vista, NSW, Austrália), pontos de inflexão foram identificados e geradas séries temporais batimento a batimento. Todos os registros foram feitos de manhã, garantindo que aspectos comportamentais influenciassem igualmente todos os animais. Valores de pressão arterial média (PAM), sistólica (PAS), diastólica (PAD), intervalo de pulso (IP) e frequência cardíaca (FC) foram obtidos e posteriormente analisados.

A análise da variabilidade do IP e da PAS foi realizada utilizando o software computacional (v2.4 CardioSeries‐http://sites.google.com/site/cardioseries), como descrito previamente.15 Séries batimento a batimento foram obtidas a partir da pressão arterial pulsátil (PAP) e convertidos em pontos com 100ms por interpolação spline cúbica (10Hz). Os dados foram divididos em sequências e em períodos de 512 pontos (51,2s) e semissobrepostas. Para o cálculo da potência espectral, os dados foram visualmente inspecionados e os segmentos não estacionários foram desconsiderados.

O espectro foi calculado diretamente pelo algoritmo transformada rápida de Fourier (FFT) e a janela de Hanning foi utilizada para atenuar distorções. O espectro é composto por bandas de baixa frequência low frequency (LF; 0,2‐0,75Hz) e alta frequência high frequency (HF; 0,75‐3Hz). Esses resultados foram expressos em unidades normalizadas por divisão das potências LF e HF pela potência total menos a potência de muito baixa frequência (VLF; <0,2Hz). LF do IP representa a modulação simpática cardíaca, HF do IP é um índice de modulação vagal, enquanto a razão LF/HF demonstra o balanço autonômico cardíaco. O LF da PAS (LFsys) indica modulação simpática vascular.

A sensibilidade espontânea do barorreflexo (SBR) foi quantificada pelo método da sequência. No programa computacional (v2.4 CardioSeries), foram processadas séries temporais, batimento a batimento, da PAS e do IP, buscando detectar sequências de pelo menos quatro batimentos consecutivos em que aumentos na PAS foram seguidos por um alongamento do IP e diminuições na PAS foram seguidas por um encurtamento do IP. Foram consideradas como sequências do barorreflexo dados com correlação linear superior a 0,85. A média do coeficiente angular das linhas de regressão linear entre a PAS e o IP foi utilizada como índice da SBR.15

Os animais foram mantidos em jejum de 12 horas e logo após foram anestesiados com halotano. Através de um capilar de vidro heparinizado, foi coletado sangue pelo plexo retro‐orbital. A amostra coletada foi acondicionada em tubo de separação e centrifugada a 3500 rotações por minuto, por 5 minutos, para obtenção do plasma. O sobrenadante foi retirado com auxílio de uma pipeta e transferido para um tubo Eppendorf®, o qual foi enviado para as análises bioquímicas dos seguintes substratos: glicose, colesterol total (CT), triacilglicerol (TAG) lipoproteína de alta densidade (HDL) e de baixa densidade (LDL).

Para dosar as concentrações plasmáticas, utilizaram‐se testes enzimáticos colorimétricos da marca Bioclin (Belo Horizonte – MG, Brasil), as leituras dos substratos foram realizadas em espectrofotômetro (modelo 800 XI, Femto, São Paulo, SP, Brasil), de acordo com as normas estipuladas pelo fabricante. Para dosar LDL e lipoproteína de muito baixa densidade (VLDL) foi utilizada a fórmula de Friedewald.16

Os valores foram expressos em média ± erro padrão da média (EPM). Os resultados de avaliação hemodinâmica, modulação autonômica e perfil bioquímico foram analisados por Anova one‐way, seguido por pós‐teste de Bonferroni, para avaliação das diferenças entre as médias dos grupos. Os valores foram considerados estatisticamente significativos quando p < 0,05. Para análise foi utilizado o software GraphPad (v.5.0, San Diego, CA, EUA).

Após quatro semanas de TR, não foi observada diferença significativa na massa corporal da prole (Tabela 1). Embora os grupos alimentados com a dieta ocidental apresentassem maior massa corporal anteriormente ao treinamento, também não houve diferença significativa no ganho de força dos animais do grupo OCTR quando comparados aos animais dos grupos C e OCS.

As variáveis hemodinâmicas são apresentadas na Tabela 2. O grupo sedentário OCS apresentou PA de repouso elevada quando comparado ao C e ao OCTR. O grupo OCTR apresentou PAM, PAS e PAD reduzidas quando comparado ao grupo OCS. Não houve alteração na FC entre os grupos.

Os resultados referentes à modulação autonômica podem ser observados na Figura 1. O grupo OCS apresentou aumento do componente LF (Figura 1a) e redução de HF (Figura 1b). O TR foi capaz de atenuar essa alteração, apresentando uma redução do componente LF e aumento do HF respectivamente, observado na Figura 1C.

OCS: grupo dieta ocidental sedentário; OCTR: grupo dieta ocidental treinado; HF: high frequency; LF: low frequency; Lfsys: LF da pressão arterial; SBR: sensibilidade do barorreflexo.*p < 0,05: OCTR vs OCS; #p < 0,05: OCTR vs C; §p < 0,05: OCS vs C. Foi utilizado o teste Anova de uma via, seguido por pós‐teste de Bonferroni.'> OCS: grupo dieta ocidental sedentário; OCTR: grupo dieta ocidental treinado; HF: high frequency; LF: low frequency; Lfsys: LF da pressão arterial; SBR: sensibilidade do barorreflexo.*p < 0,05: OCTR vs OCS; #p < 0,05: OCTR vs C; §p < 0,05: OCS vs C. Foi utilizado o teste Anova de uma via, seguido por pós‐teste de Bonferroni.' title='Modulação autonômica cardiovascular e sensibilidade espontânea do barorreflexo após quatro semanas de TR. C: grupo controle; OCS: grupo dieta ocidental sedentário; OCTR: grupo dieta ocidental treinado; HF: high frequency; LF: low frequency; Lfsys: LF da pressão arterial; SBR: sensibilidade do barorreflexo.*p < 0,05: OCTR vs OCS; #p < 0,05: OCTR vs C; §p < 0,05: OCS vs C. Foi utilizado o teste Anova de uma via, seguido por pós‐teste de Bonferroni.'/>

Figura 1.

Modulação autonômica cardiovascular e sensibilidade espontânea do barorreflexo após quatro semanas de TR. C: grupo controle; OCS: grupo dieta ocidental sedentário; OCTR: grupo dieta ocidental treinado; HF: high frequency; LF: low frequency; Lfsys: LF da pressão arterial; SBR: sensibilidade do barorreflexo.*p < 0,05: OCTR vs OCS; #p < 0,05: OCTR vs C; §p < 0,05: OCS vs C. Foi utilizado o teste Anova de uma via, seguido por pós‐teste de Bonferroni.

(0.16MB).

Além disso, o OCS apresentou valores de LFsys elevados, enquanto o grupo treinado (OCTR) apresentou redução nesta variável (Figura 1d). Apesar de não haver alteração na sensibilidade espontânea do barorreflexo (SBR) como efeito da dieta ocidental, nossos resultados mostram um aumento na SBR nos animais do grupo OCTR (Figura 1e) quando comparados aos sedentários (Figura 2).

Figura 2.

Delineamento experimental. Processo de acasalamento, inserção das dietas experimentais, protocolo de TR e registro das variáveis cardiovasculares.

(0.18MB).

As variáveis bioquímicas avaliadas foram: glicemia de jejum, colesterol total (CT), HDL, LDL, VLDL e triglicérides e podem ser observadas na Tabela 3. Os resultados mostram que os animais do grupo OCS apresentaram aumento da glicemia em jejum, do CT e da LDL quando comparados ao grupo C. Em contrapartida, os animais do grupo OCTR apresentaram redução nos valores de glicemia em jejum, CT e LDL, bem como aumento no HDL.